纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制 点击下载
| 论文标题： | 纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制 |
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| 中文摘要： | 目的 探讨吉祥草中纤细薯蓣皂苷（gracillin）诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的作用及机制。方法以A549细胞为对象，采用CCK-8法检测不同浓度（0.25、0.5、1、2、4μmol/L）gracillin作用不同时间（12、24、48h）对细胞增殖的影响。与不加药物的对照组进行比较，采用生物透射电子显微镜观察gracillin（2μmol/L）作用24h对细胞自噬小体形成的影响；通过GFP-LC3质粒转染实验检测gracillin（0.25、0.5、1、2μmol/L）作用24h后GFP-LC3在细胞自噬小体膜上的聚集情况；采用实时定量聚合酶链式反应法和Westernblot法检测gracillin（0.25、0.5、1、2μmol/L）作用24h后A549细胞中序列相似性家族102成员A（FAM102A）mRNA和蛋白的表达水平，以及自噬相关蛋白[p62、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）]和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（又名Akt）信号通路相关蛋白的表达水平。结果gracillin对A549细胞具有一定的增殖抑制作用，且呈浓度和时间依赖趋势；其作用24h的半数抑制浓度为2.55μmol/L。gracillin作用24h后，细胞胞浆内可见含双层膜结构的自噬小体；自噬小体膜上可见明显的GFP-LC3绿色荧光斑点，且有随药物浓度升高而增多的趋势。与对照组比较，gracillin不同浓度组细胞中FAM102AmRNA和蛋白的表达水平（0.5、1、2μmol/L组）、Beclin-1蛋白的表达水平（1、2μmol/L组）和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值（2μmol/L组）均显著升高，p62蛋白的表达水平（1、2μmol/L组）和Akt蛋白（1、2μmol/L组）、PI3K蛋白（2μmol/L组）的磷酸化水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论gracillin可能通过上调FAM102AmRNA和蛋白的表达、抑制PI3K/Akt信号通路来促进A549细胞发生自噬，从而发挥抑制细胞增殖的作用。 |
| 英文摘要： | OBJECTIVE To investigate the effect and mechanism of gracillin from Reineckia carnea on autophagy in non- small cell lung cancer A549 cells. METHODS Using A549 cells as subjects， the effects of different concentrations of gracillin （0.25， 0.5， 1， 2， 4 μmol/L） on the proliferation of cells were detected by CCK-8 after being treated for different time （12， 24， 48 h）. Compared with the control group without medication， the effect of gracillin （2 μmol/L） on the formation of autophagosomes in cells was observed by transmission electron microscope after 24 h of exposure. The aggregation of GFP-LC3 on autophagosome membrane was detected by GFP-LC3 plasmid transfection after being treated with gracillin （0.25， 0.5， 1， 2 μmol/L） for 24 h. Quantitative real-time PCR and Western blot assay were used to detect the mRNA and protein expressions of family with sequence similarity 102 member A（FAM102A）， the expressions of autophagy-related proteins [p62， Beclin-1， microtubule-associated protein 1 light chain 3B （LC3B）]， and the expressions of phosphoinositide 3-kinase （PI3K）/protein kinase B （Akt） signaling pathway-related proteins in A549 cells after being treated with gracillin （0.25， 0.5， 1 and 2 μmol/L） for 24 h. RESULTS Gracillin significantly inhibited the proliferation of A549 cells in a concentration- and time-dependent manner. The IC50 was 2.55 μmol/L at 24 h. After 24 h of gracillin treatment， autophagosomes with bilayer membrane structure were found in the cell cytoplasm， and GFP-LC3 green fluorescent spots on autophagosome membrane were obvious， representing an increasing trend as drug concentration. Compared with the control group， mRNA and protein expressions of FAM102A （0.5， 1， 2 μmol/L groups）， protein expression of Beclin-1 （1， 2 μmol/L groups） and LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ ratio （2 μmol/L group） were significantly increased in different concentrations of gracillin groups， while the protein expression of p62 （1， 2 μmol/L groups）， and the protein phosphorylations of Akt （1， 2 μmol/L groups） and PI3K （2 μmol/L group） were all decreased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS Gracillin can promote excessive autophagy in A549 cells by up-regulating mRNA and protein expressions of FAM102A and inhibiting PI3K/Akt signaling pathway， thus inhibiting cell proliferation. |
| 期刊： | 2024年第35卷第08期 |
| 作者： | 李燕；李亚梅；雷歌燕；康佳兰；刘明轩；张敏鸿；杨建琼 |
| 英文作者： | LI Yan，LI Yamei，LEI Geyan，KANG Jialan，LIU Mingxuan，ZHANG Minhong，YANG Jianqiong |
| 关键字： | 吉祥草；纤细薯蓣皂苷；非小细胞肺癌细胞；自噬；FAM102A；PI3K/Akt信号通路 |
| KEYWORDS： | Reineckia carnea； gracillin； non-small cell lung cancer cells； autophagy； FAM102A； PI3K/Akt signaling pathway |
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